膠原酶II型(Collagenase, Type II)是一種具有獨特的消化天然膠原和變性膠原能力。去污劑、六氯環己烷和重金屬離子可降低酶活性。專一作用于原膠原,使其斷裂進而被其他蛋白酶水解,不水解纖維蛋白,球蛋白。本產品來源于溶組織梭菌,為透析后的凍干粉末。
別名:Collagenase,Type 2;Clostridiopeptidase A;梭菌肽酶 A
物理性狀及指標
外觀:………………………………………棕褐色或淡褐色粉末
溶解性:……………………………………TESCA buffer: soluble 1~2mg/mL at 37℃
units/mg Solid (Collagen) :………………≥125CDU/mg
units/mg Solid (Caseinase):……………≥200
units/mg Solid (Clostripain):……………≥3.5
units/mg Solid (Tryptic):……………….…≥0.1
注:TESCA buffe-50 mM TES, 0.36 mM Calcium chloride, pH 7.4
酶活定義(膠原蛋白)
一個單位是指在37℃、pH值為7.5的條件下,5小時內能夠從膠原蛋白中釋放出相當于1微摩爾L-亮氨酸的肽段。
儲存條件:-20℃保存,避光防潮密閉干燥
運輸條件:濕冰運輸(按季節)
用途及描述:科研試劑,僅限應用于分子生物學、藥理學等科研方面,嚴禁用于人體。
膠原酶II型可用于:
用于骨骼、心臟、肝臟、甲狀腺和唾液腺細胞的原代分離;
用于研究高級糖基化終產物(AGE)的動脈組織;
與其他蛋白酶一起用于解剖人類腫瘤,小鼠腎臟,人腦,肺上皮和許多其他組織;
在肝臟和腎臟灌注研究,胰腺消化和非實質肝細胞的分離;
用于從大鼠肝臟制備活肝細胞和從大鼠脂肪組織中分離脂肪細胞。
生物活性
每摩爾的膠原酶可以被4g鈣原子激活。它被乙二醇雙(β-氨基乙醚)- N, N, N, N -四乙酸、β-巰基乙醇、谷胱甘肽,巰基乙酸和8-羥基喹啉所抑制。膠原酶和中性蛋白酶在從組織中進行細胞的有效釋放中起到重要作用。膠原酶識別序列-R-Pro-8-X-Gly-Pro-R-,其中X通常是中性氨基酸。
使用方法
儲存液的配制,用于細胞培養相關實驗:按照基本信息表格中溶解性進行溶解,如用于細胞實驗,請配制成液體之后用0.22μm過濾后再加入細胞。
儲存液的保存:建議現配現用,液體不是很穩定;也可分裝成單次用量,2年穩定。避免反復凍融。
使用濃度:用于組織和細胞分散的常用濃度為:0.5~2.5mg/mL,用于軟骨消化的常用濃度為1~2mg/mL,需要根據特定的實驗條件或者參考相應的文獻資料確定所需的最佳工作濃度。
組織分離
(1)使用無菌手術刀或剪刀將組織切成3~4mm大小的組織塊;
(2)利用含Ca2+、Mg2+的Hank’s平衡鹽溶液(HBSS)洗滌組織塊數次;
(3)加入足量的含Ca2+、Mg2+的HBSS,使其浸沒組織塊,并加入膠原酶至需要工作濃度;
(4)于37℃孵育4~18h。消化時使用水平搖床以及用3mM的CaCl2補充消化可以提高消化效率。
(5)已分散開的細胞可使用不銹鋼或尼龍網篩篩得,收集備用。未完全解離的組織另外添加適量的新鮮膠原酶工作液于37℃繼續孵育;
(6)利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細胞數次;
(7)細胞培養液重懸上述細胞,利用自動細胞計數器或其他方法計算活細胞密度。
(8)于細胞培養皿上利用合適細胞培養基接種細胞。 |